聊聊一個(gè)在體外輔助生殖（ART）用耗材注冊(cè)過程中經(jīng)常被問到的問題：對(duì)于那些用于操作配子（精子和卵子）、合子（受精卵）以及不同發(fā)育階段胚胎細(xì)胞的耗材產(chǎn)品（注意啊，這里明確排除了培養(yǎng)液之類的液體產(chǎn)品），當(dāng)我們已經(jīng)按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB16886.1《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第1部分：風(fēng)險(xiǎn)管理過程中的評(píng)價(jià)與試驗(yàn)》完成了全套的生物學(xué)評(píng)價(jià)后，是不是就萬(wàn)事大吉了？還需要額外做那個(gè)聽起來就挺專業(yè)的“鼠胚試驗(yàn)”嗎？這個(gè)問題直接關(guān)系到產(chǎn)品的安全性和能否順利注冊(cè)上市，咱們必須得弄明白。答案其實(shí)很明確：必須做！這不是可選項(xiàng)，而是法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)要求的強(qiáng)制性補(bǔ)充評(píng)價(jià)。為什么呢？咱們往下看就清楚了。這些耗材直接接觸的是生殖過程中最敏感、最脆弱的細(xì)胞——人類的精卵和早期胚胎。GB16886.1提供的是基礎(chǔ)、通用的生物學(xué)安全評(píng)價(jià)框架，但它并不能完全模擬和覆蓋這些特殊細(xì)胞在體外復(fù)雜培養(yǎng)環(huán)境中可能面臨的、由器械材料或工藝帶來的特定風(fēng)險(xiǎn)。想想看，一個(gè)微小的毒性反應(yīng)或不利影響，對(duì)普通組織可能沒啥，但對(duì)一個(gè)正在努力分裂發(fā)育的早期胚胎來說，可能就是滅頂之災(zāi)。所以，為了確保這些關(guān)鍵耗材對(duì)胚胎發(fā)育真正安全無(wú)害，光做常規(guī)生物學(xué)評(píng)價(jià)是不夠的，必須加上一道專門為它們?cè)O(shè)計(jì)的“安全鎖”——體外鼠胚試驗(yàn)。

理解體外輔助生殖用耗材的特殊性

首先得搞清楚我們討論的對(duì)象是什么。這里說的耗材，指的是在體外輔助生殖技術(shù)操作中，除了培養(yǎng)液、緩沖液等液體之外，那些直接用來接觸、操作、轉(zhuǎn)移或儲(chǔ)存人類配子（精子、卵子）、合子（受精卵）以及早期胚胎（比如2細(xì)胞期、4細(xì)胞期、桑葚胚、囊胚等）的器械。常見的例子包括取卵針、胚胎移植管、顯微操作針（ICSI針）、培養(yǎng)皿、離心管、移液管頭（特定用于生殖細(xì)胞操作的）、卵母細(xì)胞/胚胎冷凍載桿等等。這些產(chǎn)品的核心特點(diǎn)是：它們的直接作用對(duì)象是生殖細(xì)胞和早期胚胎。這些細(xì)胞不同于體細(xì)胞，它們處于生命發(fā)育的最初階段，對(duì)外界環(huán)境極其敏感，任何微小的化學(xué)物質(zhì)浸出、物理刺激或表面特性的不適，都可能干擾其正常的受精、分裂、發(fā)育過程，最終影響胚胎質(zhì)量和妊娠結(jié)局。

GB16886.1生物學(xué)評(píng)價(jià)的核心內(nèi)容和局限性

GB16886.1是我們醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)的基石標(biāo)準(zhǔn)。它要求我們從產(chǎn)品的材料、預(yù)期用途、與人體接觸的性質(zhì)（接觸部位、接觸時(shí)間）等角度進(jìn)行全面的風(fēng)險(xiǎn)分析，并據(jù)此選擇必要的生物學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目。常規(guī)的評(píng)價(jià)項(xiàng)目可能包括細(xì)胞毒性試驗(yàn)（看材料會(huì)不會(huì)直接毒死細(xì)胞）、致敏試驗(yàn)（看會(huì)不會(huì)引起過敏）、刺激或皮內(nèi)反應(yīng)試驗(yàn)（看對(duì)組織有沒有刺激性）、急性全身毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)（看會(huì)不會(huì)損傷DNA）、植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)（針對(duì)長(zhǎng)期植入物）等等。這些試驗(yàn)非常重要，覆蓋了醫(yī)療器械生物學(xué)安全的主要方面。但是，它們存在一個(gè)關(guān)鍵的局限性：這些試驗(yàn)使用的測(cè)試系統(tǒng)（如L929小鼠成纖維細(xì)胞、豚鼠皮膚、兔子肌肉、細(xì)菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞系用于遺傳毒性等）無(wú)法準(zhǔn)確模擬和評(píng)估產(chǎn)品對(duì)人類生殖細(xì)胞和早期胚胎發(fā)育的潛在特異性影響。一個(gè)材料對(duì)成纖維細(xì)胞沒有毒性，不代表它對(duì)小鼠或人類的早期胚胎也沒有不良影響。胚胎發(fā)育是一個(gè)高度復(fù)雜和精密調(diào)控的過程，有其獨(dú)特的敏感性和易損性。常規(guī)的生物學(xué)試驗(yàn)?zāi)Ｐ蜔o(wú)法捕捉到這種針對(duì)胚胎發(fā)育的特異性毒性風(fēng)險(xiǎn)。

為什么必須進(jìn)行鼠胚試驗(yàn)？法規(guī)與標(biāo)準(zhǔn)要求

正是基于上述的特殊性和常規(guī)評(píng)價(jià)的局限性，國(guó)內(nèi)外監(jiān)管機(jī)構(gòu)和標(biāo)準(zhǔn)組織都明確要求，對(duì)于直接接觸配子和胚胎的ART用耗材（液體產(chǎn)品有類似但不同的要求），在完成GB16886.1要求的生物學(xué)評(píng)價(jià)后，必須額外進(jìn)行體外鼠胚試驗(yàn)。這并非可有可無(wú)，而是強(qiáng)制性的安全評(píng)價(jià)環(huán)節(jié)。國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心（器審中心）在歷次發(fā)布的注冊(cè)問題答疑中反復(fù)強(qiáng)調(diào)這一點(diǎn)。例如，在器審中心發(fā)布的答疑中明確指出：“體外輔助生殖用耗材（體外輔助生殖用液除外）產(chǎn)品的作用對(duì)象是配子、合子及不同發(fā)育階段的胚胎細(xì)胞，除常規(guī)生物學(xué)評(píng)價(jià)外，還應(yīng)參照YY/T1434-2016進(jìn)行體外鼠胚試驗(yàn)?！?這個(gè)要求在北京、上海等地的醫(yī)療器械審評(píng)檢查常見問題解答中也被多次重申。

鼠胚試驗(yàn)的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：YY/T1434-2016

這項(xiàng)強(qiáng)制性試驗(yàn)的具體操作方法和要求，詳細(xì)規(guī)定在國(guó)家醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) YY/T1434-2016《人類體外輔助生殖技術(shù)用醫(yī)療器械 體外鼠胚試驗(yàn)》中。這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)是專門為評(píng)價(jià)ART醫(yī)療器械（包括耗材和用液）對(duì)胚胎發(fā)育的潛在毒性而制定的。它的核心原理是：利用小鼠的早期胚胎（1-細(xì)胞受精卵或2-細(xì)胞胚胎）作為模型，在體外培養(yǎng)過程中，模擬該耗材產(chǎn)品在實(shí)際ART操作中的使用方式（例如，將耗材的浸提液加入培養(yǎng)環(huán)境，或直接用耗材接觸胚胎），觀察這些胚胎能否在設(shè)定的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)（通常1-細(xì)胞胚胎培養(yǎng)96小時(shí)，2-細(xì)胞胚胎培養(yǎng)72小時(shí)）正常發(fā)育到囊胚階段，并評(píng)估形成的囊胚質(zhì)量。通過比較供試品組（使用待測(cè)耗材）、陰性對(duì)照組（使用已知安全的培養(yǎng)液和耗材）和陽(yáng)性對(duì)照組（使用已知有毒性的物質(zhì)）的囊胚形成率和囊胚質(zhì)量，來判斷待測(cè)耗材是否對(duì)胚胎發(fā)育存在潛在毒性。

鼠胚試驗(yàn)的關(guān)鍵步驟概述

1.試驗(yàn)準(zhǔn)備：

（1）供試品處理： 根據(jù)待測(cè)耗材的形態(tài)（固體/器具）和預(yù)期接觸方式（如接觸時(shí)間長(zhǎng)短），按照GB/T 16886.12和YY/T 1434的要求制備供試品浸提液。推薦使用M16培養(yǎng)液作為浸提介質(zhì)。

（2）對(duì)照組設(shè)置：必須設(shè)立陰性對(duì)照組（通常使用M2/M16培養(yǎng)液及已知安全的耗材）和陽(yáng)性對(duì)照組（使用經(jīng)驗(yàn)證對(duì)胚胎有毒性的物質(zhì)）。陽(yáng)性對(duì)照用于證明試驗(yàn)系統(tǒng)的敏感性，陰性對(duì)照用于提供正常發(fā)育的基線。

（3）試驗(yàn)動(dòng)物與胚胎獲取：選用6-8周齡健康雌鼠，通過激素（PMSG和hCG）注射誘導(dǎo)超數(shù)排卵，并與同品系雄鼠交配。在注射hCG后特定時(shí)間點(diǎn)（取1-細(xì)胞胚胎約18-22小時(shí)，取2-細(xì)胞胚胎約40-48小時(shí)）處死孕鼠，從輸卵管中收集胚胎。推薦優(yōu)先使用1-細(xì)胞胚胎。

（4）培養(yǎng)皿準(zhǔn)備：在培養(yǎng)皿中制備覆蓋培養(yǎng)用油的培養(yǎng)液微滴（30-50μL），并在CO2培養(yǎng)箱中預(yù)平衡。

2.胚胎分組與培養(yǎng)：

（1）將收集到的形態(tài)正常的胚胎（每組通常不少于50個(gè)，且來自3-5只不同母鼠的胚胎應(yīng)隨機(jī)分配到各組）隨機(jī)分配到供試品組、陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組。

（2）將胚胎置于已平衡好的相應(yīng)培養(yǎng)液（供試液、陰性對(duì)照液、陽(yáng)性對(duì)照液）微滴中。

（3）在嚴(yán)格控制的環(huán)境下（37°C, 5%或6% CO2, 飽和濕度）進(jìn)行體外培養(yǎng)。1-細(xì)胞胚胎培養(yǎng)至96小時(shí)，2-細(xì)胞胚胎培養(yǎng)至72小時(shí)。

3.結(jié)果觀察與判定：

（1）在培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，在顯微鏡下觀察并記錄各組發(fā)育到囊胚階段的胚胎數(shù)量，計(jì)算囊胚形成率。

（2）評(píng)估形成的囊胚質(zhì)量，區(qū)分發(fā)育良好的囊胚（囊胚腔充分?jǐn)U張，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)大小適中，滋養(yǎng)層細(xì)胞緊密均勻）和發(fā)育差的囊胚（囊胚腔小，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)小或無(wú)，滋養(yǎng)層細(xì)胞稀疏）。

（3）標(biāo)準(zhǔn)（YY/T1434）通常要求供試品組的囊胚形成率需達(dá)到陰性對(duì)照組的一定比例（例如不低于80%或具體標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定值），且囊胚質(zhì)量應(yīng)良好，才能判定該耗材在本試驗(yàn)條件下對(duì)鼠胚發(fā)育無(wú)潛在毒性。需要與陰性和陽(yáng)性對(duì)照組的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較分析。

進(jìn)行鼠胚試驗(yàn)的注意事項(xiàng)

（1）實(shí)驗(yàn)室條件：試驗(yàn)必須在具備嚴(yán)格環(huán)境控制（潔凈度、溫濕度）的專業(yè)生殖實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，避免環(huán)境因素干擾。

（2）試驗(yàn)設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)性：

（3）樣品代表性：建議測(cè)試樣品應(yīng)覆蓋不同生產(chǎn)批次，特別是零時(shí)刻（剛生產(chǎn)）和貨架有效期終點(diǎn)的產(chǎn)品，以評(píng)估產(chǎn)品老化及與包裝容器相互作用的影響。

（4）設(shè)置上市產(chǎn)品對(duì)照：強(qiáng)烈建議在試驗(yàn)中增設(shè)一個(gè)已上市同類產(chǎn)品作為對(duì)照組（除陰性和陽(yáng)性對(duì)照外）。這有助于在試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)異常時(shí)進(jìn)行更準(zhǔn)確的判定，并為試驗(yàn)質(zhì)量提供參照。目前很多提交的報(bào)告中缺乏此項(xiàng)。

（5）接觸方式模擬：試驗(yàn)步驟（特別是供試品與胚胎的接觸時(shí)間、接觸方式）應(yīng)盡可能模擬該耗材在人類ART實(shí)際操作中的使用情況。YY/T1434的附錄B提供了針對(duì)不同接觸時(shí)間耗材的試驗(yàn)策略指導(dǎo)。例如，胚胎移植管接觸時(shí)間短，其試驗(yàn)設(shè)計(jì)就應(yīng)與培養(yǎng)皿（長(zhǎng)時(shí)間接觸）不同。

（6）試劑耗材安全性：試驗(yàn)中使用的所有基礎(chǔ)培養(yǎng)液、耗材（如培養(yǎng)皿、移液管頭）等，理論上都應(yīng)是已通過鼠胚試驗(yàn)驗(yàn)證安全無(wú)毒的。實(shí)際操作中這可能有難度，但應(yīng)盡量選擇來源可靠、背景清晰的材料。

結(jié)論

所以，回到最初的問題：“體外輔助生殖用耗材（體外輔助生殖用液除外）產(chǎn)品按照GB16886.1進(jìn)行了生物學(xué)評(píng)價(jià)后還應(yīng)進(jìn)行鼠胚試驗(yàn)嗎？” 答案是肯定的、必須的。GB16886.1是基礎(chǔ)，提供了通用的生物學(xué)安全框架。但對(duì)于這些直接接觸人類生命起點(diǎn)的、極其脆弱的生殖細(xì)胞和早期胚胎的特殊耗材，僅靠基礎(chǔ)評(píng)價(jià)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。YY/T1434-2016規(guī)定的體外鼠胚試驗(yàn)是法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)明確要求的、針對(duì)胚胎發(fā)育特異性毒性的關(guān)鍵評(píng)價(jià)手段。它利用小鼠胚胎模型，模擬實(shí)際操作環(huán)境，直觀評(píng)估耗材對(duì)胚胎分裂、發(fā)育直至形成囊胚能力的影響。只有通過了這項(xiàng)嚴(yán)格的“胚胎安全測(cè)試”，并結(jié)合GB16886.1的全面評(píng)價(jià)結(jié)果，才能更有力地證明這類耗材在生物學(xué)上是安全的，才能為它們?cè)隗w外輔助生殖技術(shù)中的安全應(yīng)用提供堅(jiān)實(shí)的科學(xué)依據(jù)，最終支持其成功注冊(cè)上市。

希望這篇文章能清晰解答您的疑問。如果您在具體產(chǎn)品的注冊(cè)申報(bào)過程中遇到鼠胚試驗(yàn)的設(shè)計(jì)或?qū)嵤﹩栴}，思途CRO的專業(yè)團(tuán)隊(duì)可以提供符合法規(guī)要求的支持服務(wù)。